פעסטיצידן שפּילן אַ קריטישע ראָלע אין אַדרעסירן גלאָבאַלע עסן מאַנגל און קעמפן וועקטאָר-געטראָגענע מענטשלעכע קראַנקייטן. אָבער, די גראָוינג פּראָבלעם פון פעסטיציד קעגנשטעל דרינגלעך ריקווייערז די ופדעקונג פון נייַע קאַמפּאַונדז וואָס צילן אונטער-ניצט צילן. ינסעקט טראַנזיענט רעצעפּטאָר פּאָטענציעל (TRPV) טשאַנאַלז - נאַנזשאָנג (נאַן) און ינאַקטיוו (Iav) - קענען פאָרעם העטעראָלאָגאָוס טשאַנאַלז (נאַן-Iav) און לאָקאַליזירן צו מעכאַנאָסענסאָרי אָרגאַנס וואָס מעדיאַטירן געאָטראָפּיזם, הערן און פּראָפּריאָסעפּשאַן אין ינסעקץ. עטלעכע פעסטיצידן, אַזאַ ווי אַפידאָפּיראָלידאָנע (AP), צילן נאַן-Iav דורך אומבאַקאַנט מעקאַניזאַמז. AP איז עפעקטיוו קעגן דורכשטעכנדיק-זויגנדיק ינסעקטן (העמיפּטעראַנס), פּרעווענטינג פידינג דורך דיסראַפּטינג די פונקציע פון די פילאַמענץ. AP קען בינדן בלויז צו נאַן, אָבער בלויז נאַן-Iav קען ינטעראַקט מיט אַגאָניסטן, אַרייַנגערעכנט ענדאָגענאָוס ניקאָטינאַמיד (NAM), דערמיט יגזאַביטינג קאַנאַל טעטיקייט. טראָץ נאַן-Iav ס פּאָטענציעל ווי אַן ינסעקטיציד ציל, קליין איז באַוווסט וועגן זיין קאַנאַל אַסעמבלי, רעגולאַטאָרי ביינדינג זייטלעך און Ca2+-אָפענגיק רעגולאַציע, כינדערינג ווייַטער ינסעקטיציד אַנטוויקלונג. אין דעם שטודיע, איז קריאָ-עלעקטראָן מיקראָסקאָפּיע גענוצט געוואָרן צו באַשטימען די סטרוקטור פון נאַן-יאַוו אין העמיפּטעראַ אינסעקטן אין דעם קאַלמאָדולין-ליגאַנד-פֿרײַעם צושטאַנד, ווי אויך מיט AP און NAM בײַ דער גרענעץ פֿון דעם אַנקירין ריפּיט ציטאָפּלאַזמישן דאָמעין (ARD). איבעראשנד, האָבן מיר געפֿונען אַז דער נאַן פּראָטעין אַליין קען פֿאָרמען אַ פּענטאַמער, וואָס איז סטאַביליזירט דורך AP-פֿאַרמיטלטע ARD אינטעראַקציעס. דעם שטודיע אַנטפּלעקט מאָלעקולאַרע אינטעראַקציעס צווישן אינסעקטיצידן און אַגאָניסטן און נאַן-יאַוו, אונטערשטרייַכנדיג די וויכטיקייט פֿון ARD אין קאַנאַל פֿונקציע און פֿאַרזאַמלונג, און אויספֿאָרשנדיק דעם מעכאַניזם פֿון Ca2+ רעגולאַציע.
קעגן דעם הינטערגרונט פון אלץ שטרענגערע גלאבאלע קלימאט ענדערונג, איז די פארערגערונג פון גלאבאלע עסן זיכערהייט איינע פון די הויפט אויספארדערונגען פון דעם 21סטן יארהונדערט, מיט קאסקיידינג קאנסעקווענצן פאר דער געזעלשאפט.1,2די וועלט געזונטהייט ארגאניזאציע'ס צושטאנד פון עסן זיכערהייט און דערנערונג אין דער וועלט 2023 (SOFI) באריכט שאַצט אַז בעערעך 2.33 ביליאָן מענטשן ווערלדווייד ליידן פון מיטלמעסיגע ביז שווערע עסן אומזיכערהייט, אַ לאַנג-שטייענדיק פּראָבלעם.3,4ליידער, עס ווערט געשאצט אז 20% ביז 30% אדער מער פון די גערעטעניש גייט יערליך פארלוירן צוליב שאדנס און פאטאגענס, און גלאבאלע אנווארימונג וועט פארשטארקן די קעגנשטאנד פון שאדנס און די גערעטעניש-וואוילשטאנד.4,5,6,7,8פּעסטאַסייד אַנטוויקלונג איז קריטיש ניט נאָר צו באַשיצן פלאנצן פון שאַטן און רעדוצירן די פאַרשפּרייטונג פון וועקטאָר-געטראָגענע פּאַטאַדזשענס, נאָר אויך צו באַקעמפן וועקטאָר-געטראָגענע מענטשלעכע קראַנקייטן ווי דענגו פיבער, מאַלאַריאַ און טשאַגאַס קרענק, וואָס ווערן מער און מער קעגנשטעליק צו פּעסטאַסיידס.5,9,10,11
צווישן די הויפּט צילן פון נעוראָטאָקסישע אינסעקטיצידן, רעפּרעזענטירט דער העטעראָטעטראַמעריש TRPV קאַנאַל נאַנטשונג (נאַן)-ינאַקטיוו (Iav) אַ קלאַס פון אינסעקטיציד צילן וואָס זענען ערשט אַנטדעקט געוואָרן אין די לעצטע יאָרצענדלינג, אַרייַנגערעכנט קאמערציעל בנימצא אינסעקטיצידן ווי ימידאַקלאָפּריד און פּיראַקלאָסטראָבין.12,13,14דער האַלב-סינטעטישער אינסעקטיציד אַפידאָפירראָליפען (AP) איז אַ לעצטנס אַנטוויקלט און קאמערציאַליזירט פּראָדוקט וועמענס הויפּט קאָמפּאָנענט איז דער אַקטיווער אינסעקטיציד אינסקאַליס®, וואָס בינדט AP אויף אַ סובנאַנאָמאָולאַר טעטיקייט מדרגה.15AP ווייזט נידעריגע אַקוטע טאַקסיסיטי צו פּאָלינאַטאָרס, נוצלעכע ינסעקטן און אַנדערע ניט-ציל אָרגאַניזמען, און ווען געניצט לויט די אינסטרוקציעס אויף די עטיקעט, קען עס רעדוצירן דעם קעגנשטעל דרוק צו אַנדערע אינסעקטיצידן.16,17,18נאַן און יאַוו זענען ברייט פאַרשפּרייט צווישן אינסעקט מינים, ווערן קאָ-אויסגעדריקט בלויז אין כאָרדאַל סטרעטש רעסעפּטאָר נעוראָנען פון די אַנטענע און גלידער, און זענען קריטיש פֿאַר הערן, גראַוויטאַציע וואָרנעמונג, און פּראָפּריאָסעפּשאַן.13,16,19,20,21,22AP, ימידאַקלאָפּריד, און פּיראַקלאָסטראָבין סטימולירן דעם נאַן-יאַוו קאָמפּלעקס דורך אַ יינציקן מעханіזם, וואָס לעסאָף אינהיבירט פּראָפּריאָסעפּטיווע סיגנאַל טראַנסדאַקשאַן.13,16,23ביי דורכשטעכנדיקע אינסעקטן (העמיפּטעראַנען) ווי למשל אַפידס און ווייסע פליגן, שטערט דער פארלוסט פון פּראָפּריאָסעפּציע זייער פידינג-מעגלעכקייט, וואָס פירט צום טויט.13,24אינטערעסאנט, AP ווייזט א הויכע אפיניטי פארן נאן-אייוו קאמפלעקס און א נידעריגע אפיניטי פאר נאן אליין. בינדונג פון AP צו נאן-אייוו אינדוצירט אן עלעקטרישן שטראם, אבער בינדונג צו נאן אליין סטימולירט נישט קאנאל אקטיוויטעט. אייוו אליין בינדט זיך בכלל נישט צו AP.16דאָס סאַגדזשעסטירט אַז Nan און Iav קענען זיך בינדן צו שאַפֿן פֿאַרשידענע Nan-Iav קאַנאַל קאָמפּלעקסן (למשל, מיט פֿאַרשידענע סטאָכיאָמעטרישע פּראָפּאָרציעס אָדער פֿאַרשידענע אָרדענונגען אין דער זעלבער סטאָכיאָמעטרישער פּראָפּאָרציע) אָדער אַז AP קען זיך בינדן צו קייפל ערטער. דערצו, דער נאַטירלעכער אַגאָניסט ניקאָטינאַמיד (NAM) בינדט זיך צו דראָסאָפילאַ Nan-Iav מיט מיקראָמאָלעאַלער אַפיניטי, וואָס ווײַזט אויף עפֿעקטן ענלעך צו די פֿון אַפֿידן (AP) אין וויטראָ.16,25און אינהיביטינג אַפיד רעפּראָדוקציע און דערנערונג, וואָס לעסאָף פירט צו זייער טויט25,26די דאטן ברענגען ארויף אסאך פראגעס. למשל, עס בלייבט נישט קלאר ווי דער נאן-אייוו העטעראדיימער ווערט געשאפן, וועלכע בינדונג זייטלעך ווערן גענוצט צו מאדולירן קליינע מאלעקולן, און ווי די קליינע מאלעקולן רעגולירן קאנאל פונקציע דורך אונטערדריקן פראפריאסעפציע. דערצו, די סיבות פארוואס נאן אליין איז נישט אקטיווע און האט א נידריגע אפיניטי פאר AP, בשעת דער נאן-אייוו העטעראדיימער איז אקטיוו און בינדט AP מיט א העכערע אפיניטי, בלייבן נישט קלאר. צום סוף, איז ווייניג באקאנט וועגן דער Ca2+-אפהענגיקער רעגולאציע פון נאן-אייוו פונקציע און ווי עס איז אינטעגרירט אין נעוראנאלע סיגנאלינג פראצעסן.. 13,21
אין דעם שטודיע, קאמבינירנדיק קריאָ-עלעקטראָן מיקראָסקאָפּיע, עלעקטראָפֿיזיאָלאָגיע, און ראַדיאָליגאַנד בינדונג טעקניקס, האָבן מיר אויפגעקלערט די פֿאַרזאַמלונג פֿון נאַן-Iav און דעם מעכאַניזם פֿון זײַן בינדונג צו קליינע מאָלעקול רעגולאַטאָרן. דערצו, האָבן מיר דעטעקטירט קאָנסטיטוטיוו געבונדענע קאַלמאָדולין (CaM) צו Iav און AP-סטאַביליזירטע נאַן פּענטאַמערן. די רעזולטאַטן געבן וויכטיקע אײַנבליקן אין דער רעגולאַציע פֿון קאַלסיום יאָנען אין קאַנאַלן, קאַנאַל פֿאַרזאַמלונג, און די פֿאַקטאָרן וואָס באַשטימען ליגאַנד בינדונג אַפֿיניטי. נאָך וויכטיקער, האָבן מיר באַשטעטיקט אַז ARD שפּילט אַ צענטראַלע ראָלע אין די פּראָצעסן. אונדזער שטודיע פֿון גאַנצע אינסעקט קאַנאַלן געבונדן צו באַטייַטיקע לאַנדווירטשאַפטלעכע פּעסטאַצידן.27, 28, 29דאָס עפֿנט אויסזיכטן פֿאַר דער אַנטוויקלונג פֿון דער פּעסטאַציד אינדוסטריע, פֿאַרבעסערט די עפֿעקטיווקייט און ספּעציפֿישקייט פֿון פּעסטאַצידן, און ערמעגלעכט די אַפּליקאַציע פֿון TRPV-געצילטע קאַמפּאַונדז צו אַנדערע מינים צו אַדרעסירן גלאָבאַלע עסן זיכערהייט און די פֿאַרשפּרייטונג פֿון וועקטאָר-געטראָגענע קראַנקייטן.
מיר האָבן אויך געפֿונען אַז Nan-Iav ווערט רעגולירט דורך Ca2+, און דער מעханіזם פֿון רעגולאַציע ווערט געפֿירט דורך קאָנסטיטוטיוו געבונדענע CaM. וויכטיק, די Ca2+-אָפּהענגיקע רעגולאַציע פֿון Nav דורך CaM פֿאַרשיידט זיך באַדייטנד פֿון די מעханіזמען פֿון רעגולאַציע פֿון אַנדערע יאָן קאַנאַלן (למשל, וואָולטאַזש-געיטעד Na+ קאַנאַלן און TRPV5/6 קאַנאַלן).52,53,54,55,56,57אין דעם Nav1.2 קאַנאַל, פֿאַרבינדט זיך דער C-טערמינאַל דאָמעין פֿון CaM העליקאַל מיטן C-טערמינאַל דאָמעין (CTD), און Ca2+ אינדוצירט די ביינדינג פֿון זײַן N-טערמינאַל דאָמעין צום דיסטאַלן טייל פֿון CTD.56אין דעם TRPV5/6 קאַנאַל, בינדט זיך דער C-טערמינאַל דאָמעין פון CaM צו CTH, און Ca2+ אינדוצירט אַן אויפשטייגנדיקע אויסברייטונג פון זיין N-טערמינאַל דאָמעין אין די פּאָרע, דערמיט בלאָקירנדיק קאַטיאָן פּערמעאַביליטי.53,54מיר פאָרשלאָגן אַ מאָדעל פֿאַר דער Ca2+-רעגולירטער פֿונקציע פֿון Nan-Iav-CaM (פֿיגור 4h). אין דעם מאָדעל בינדט זיך דער N-טערמינאַל דאָמעין פֿון CaM קאָנסטיטוטיוו צום C-טערמינאַל דאָמעין (CTH) פֿון Iav. אין רו-שטאַנד (נידעריקע [Ca2+] קאָנצענטראַציע), אינטעראַקטירט דער C-טערמינאַל דאָמעין פֿון CaM מיט Nan, סטאַביליזירנדיק די ARD קאָנפֿאָרמאַציע און דערמיט פּראָמאָוויִרט קאַנאַל עפֿענונג. בינדונג פֿון אַן אַגאָניסט/ינסעקטיציד צום קאַנאַל אינדוצירט פּאָרע עפֿענונג, וואָס פֿירט צו Ca2+ אינפֿלוס. Ca2+ בינדט זיך דאַן צו CaM, וואָס פֿאַראורזאַכט דיסאָסיאַציע פֿון דעם C-טערמינאַל דאָמעין פֿון דעם ARD פֿון Nan. ווײַל בלאָקירן CaM בינדונג באַזײַטיקט אין עיקר דעם אינהיביטאָרישן עפֿעקט פֿון Ca2+, מאָדולירט די דיסאָסיאַציע ARD מאָביליטעט, דערמיט פֿאַראורזאַכט Ca2+-אָפּהענגיקע אינהיביציע אָדער דעסענסיטיזאַציע. די שנעלע אָפּהיילונג פֿון קאַנאַל קעראַנץ נאָך קאַלסיום יאָן עלוציע (פֿיגור 4g) פֿאָרשלאָגט אַז דער מעקאַניזם פֿאַרלייכטערט שנעלע רעאַקציעס צו Ca2+-פֿאַרמיטלטע נעוראָנאַלע סיגנאַלן. דערצו, די C-טערמינאלע ראיאן פון Iav, וואס בלייבט שלעכט פארשטאנען, איז געמאלדן געווארן צו שפילן אנדערע ראלעס אין קאנאל טארגעטינג און היינטיגע רעגולאציע.21
צום סוף, אונדזער שטודיע פּרעזענטירט די הויך-רעזאָלוציע סטרוקטור פון אַן אינסעקטיציד-אינסעקטיציד TRP קאַנאַל קאָמפּלעקס פון לאַנדווירטשאַפטלעכער וויכטיקייט - אַן ענטדעקונג פריער אומבאַקאַנט צו אונדז. באַמערקענסווערט, מיר האָבן כאַראַקטעריזירט די סטרוקטור און פונקציע פון די ינסעקט קאַנאַל אין מענטשלעכע סעלז (HEK293S GnTi–) אלא ווי אין ינסעקט סעלז. אין ליכט פון גראָוינג ינסעקטיציד קעגנשטעל און אָנגאָינג דרוק אויף עסנוואַרג זיכערהייט און פּאַטאַדזשאַנז, אונדזער אַרבעט גיט וויכטיק אינפֿאָרמאַציע וואָס וועט פאַסילאַטייט די אַנטוויקלונג פון נייַע ינסעקטיציידז פֿאַר נוץ פון מענטשלעך געזונט און גלאבאלע עסנוואַרג זיכערהייט. שטודיעס האָבן געוויזן אַז ינסעקטיציידז אַזאַ ווי AP זענען עפעקטיוו קעגן עטלעכע פּעסץ ווען געניצט לויט עטיקעט ינסטראַקשאַנז און האָבן נידעריק אַקוטע טאַקסיסיטי צו נוציק פּאַלינירערז, דעמאַנסטרייטינג זייער ענווייראָנמענטאַל זיכערהייט.13,16דערצו, טעסטן פון עטלעכע AP דעריוואַטן אויף מאַסקיטאָס האט געוויזן אַז זיי פאַרלירן מיט דער צייט זייער פיייקייט צו פליען. פֿאַרשטיין ווי די מאָדולירנדיקע קאַמפּאַונדז בינדן זיך צו נאַן-Iav וועט ערלייכטערן די מאָדיפיקאַציע פון עקזיסטירנדיקע קאַמפּאַונדז אָדער די אַנטוויקלונג פון נייע קאַמפּאַונדז פֿאַר מער עפעקטיוו אוןפּינקטלעךשאָדן קאָנטראָל. אונדזער שטודיע ווייזט אַז די נאַן-יאַוו ARD צובינד איז קריטיש ניט בלויז פֿאַר רעגולירן די טעטיקייט פון ענדאָגענאָוס קאַמפּאַונדז, פּעסטאַסיידז, און Ca2+-CaM, אָבער אויך פֿאַר קאַנאַל אַסעמבלי. מיר פֿאָרשלאָגן אַז דיסראַפּשאַן פון העטעראָדימער אַסעמבלי מיט קליינע מאַלאַקיולז קען זיין אַ יינציק און פּראַמאַסינג צוגאַנג פֿאַר די אַנטוויקלונג פון יאָן קאַנאַל ינכיבאַטאָרס.
פֿון די אַכט אָרטאָלאָגישע גענעס, זענען די פֿול-לענג גענעס פֿון די ברוינע קעפֿער (Halyomorpha halys) Nanchung און Inactive אויסגעקליבן געוואָרן, וואָס ווײַזן אויף אַן אויסגעצייכנטע סטאַביליטעט אין דיטערדזשענטן. די סינטעזירטע גענעס זענען קאָדאָן-אָפּטימיזירט געוואָרן פֿאַר מענטשלעכער אויסדרוק און קלאָנירט אין דעם pBacMam pCMV-DEST וועקטאָר (Life Technologies) ניצנדיק XhoI און EcoRI רעסטריקציע זייטלעך. דאָס האָט זיכער געמאַכט אַז די קלאָנען זענען אין ראַם מיט די C-טערמינאַל GFP-FLAG-10xHis און mCherry-FLAG-10xHis טעגס, וועלכע ווערן געשפּאָלטן דורך HRC-3C פּראָטעאַזע (PPX), וואָס דערמעגלעכט אומאָפּהענגיקע...אויסדרוקדי פּריימערס געניצט צו קלאָנירן נאַנטשונג און ינאַקטיוו אין די pBacMam וועקטאָר זענען געווען ווי פאלגט:
מיקראָסקאָפּישע בילדער פון יחיד פּאַרטיקלען זענען באקומען אויף אַ טיטאַן קריאָס G2 טראַנסמיסיע עלעקטראָן מיקראָסקאָפּ (FEI) יקוויפּט מיט אַ K3 קאַמעראַ און אַ גאַטאַן ביאָקוואַנטום ענערגיע פילטער. דער מיקראָסקאָפּ איז געווען אַפּערירט ביי 300 keV, מיט אַן ענערגיע סעטינג פון 20 eV, אַ מוסטער פּיקסעל גרייס פון 1.08 Å/פּיקסעל (נאָמינאַל מאַגניפיקאַטיאָן פון 81,000x), און אַ דעפאָקוס גראַדיענט ריינדזשינג פון -0.8 צו -2.2 μm. ווידעא רעקאָרדינג איז דורכגעפירט ביי 40 ראָמען פּער סעקונדע ניצן אַ לאַטיטוד S מיקראָסקאָפּ (גאַטאַן) מיט אַ נאָמינאַלע דאָזע קורס פון 25 e–px−1 s−1, אַן עקספּאָוזשער צייט פון 2.4 s, און אַ גאַנץ דאָזע פון בעערעך 60 e–Å−2.
שטראַל-אינדוצירטע באַוועגונג קאָרעקציע און דאָזע וואָג זענען דורכגעפירט געוואָרן אויף פילם ניצנדיק MotionCor2 אין RELION 4.061. קאָנטראַסט טראַנספער פונקציע (CTF) פּאַראַמעטער עסטימאַציע איז דורכגעפירט געוואָרן אין קריאָספּאַרק ניצנדיק די פּאַטש-באַזירטע CTF עסטימאַציע מעטאָדע62. פאָטאָמיקראָגראַפס מיט אַ CTF פּאַסיק רעזאָלוציע ≥4 Å זענען אויסגעשלאָסן געוואָרן פון דער ווייטערדיקער אַנאַליז. טיפּישערווייַז, אַ סאַבסעט פון 500-1000 פאָטאָמיקראָגראַפס איז געניצט געוואָרן פֿאַר פּונקט סעלעקציע אין קריאָספּאַרק, נאכגעגאנגען דורך עטלעכע ראָונדס פון 2D קלאַסיפיקאַציע נאָך פֿילטערינג צו באַקומען אַ קלאָר רעפֿערענץ בילד פֿאַר טעמפּלאַט-באַזירטע פּאַרטיקל סעלעקציע. פּאַרטיקאַלז זענען דעמאָלט עקסטראַקטעד ניצנדיק 64-פּיקסעל באַונדינג באָקסעס און 4-פאָולד בינינג. עטלעכע ראָונדס פון 2D קלאַסיפיקאַציע זענען דורכגעפירט געוואָרן צו באַזייַטיקן אַנוואָנטיד פּאַרטיקל קאַטעגאָריעס. דער ערשט 3D מאָדעל איז רעקאָנסטרויִרט ניצנדיק אַב איניטיאָ רעקאָנסטרוקציע און ראַפינירט ניצנדיק ניט-יוניפאָרמע ראַפינירונג אין קריאָספּאַרק. 3D קלאַסיפיקאַציע איז דורכגעפירט געוואָרן אין קריאָספּאַרק אָדער RELION באַזירט אויף ARD העטעראָגעניטי. קיין באַדייטנדיק העטעראָגעניטי פון מעמבראַן דאָומיינז איז נישט באמערקט געוואָרן. פּאַרטיקאַלז זענען ראַפינירט ניצנדיק די C1 און C2 מעטאָדן; טיילכלעך מיט העכערער C2 רעזאָלוציע זענען באַטראַכט געוואָרן סימעטריש אין באַצוג צו C2 און אימפּאָרטירט אין RELION פֿאַר בייעסיאַן ראַפינירונג. די טיילכלעך זענען דערנאָך צוריקגעפֿירט געוואָרן צו קריאָספּאַרק פֿאַר לעצטער נישט-איינהייטלעכער און לאָקאַלער ראַפינירונג. די לעצטע רעזאָלוציע און טיילכלעך ציילן ווערן געוויזן אין טאַבעלע 1.
ביים פּראַסעסן פון Nan+AP פּענטאַמערן, האָבן מיר אויסגעפאָרשט פֿאַרשידענע מעטאָדן צו פֿאַרבעסערן די רעזאָלוציע פֿון מעמבראַן דאָמעינען (ספּעציעל די פּאָרע געגנט), ווי סיגנאַל סובטראַקציע און TMD מאַסקינג. אָבער, די פּרוּוון זענען נישט געווען מצליח צוליב דער פּאָטענציעל עקסטרעמער אומאָרדענונג אין דער פּאָרע געגנט און די אַלגעמיינע העטעראָגעניטי פֿון די TMD. די לעצטע רעזאָלוציע איז געווען קאַלקולירט מיט אַ מאַסקע וואָס איז אויטאָמאַטיש גענערירט געוואָרן דורך דער ניט-איינהייטלעכער פּראַסעסינג מעטאָדע אין קריאָספּאַרק, בפֿרט צילנדיק די ARD געגנט. דאָס האָט דערגרייכט באַדייטנד העכערע רעזאָלוציע ווי די פֿון די מעמבראַן דאָמעינען (ספּעציעל די VSLD געגנט).
ערשטע דע נאווא מאדעלן פון די אפא פארמען פון די נאנטשונג און אינאקטיווע באגס זענען ערשט גענערירט געווארן ניצנדיג Coot63, און מאדעלן פון די נאן און איאוו באגס זענען גענערירט געווארן ניצנדיג AlphaFold264 צו אידענטיפיצירן נידריג-זיכערהייט געגנטן. קאלמאדולין מאדעלירן איז באזירט אויף רידזשיד-באדי פאסן פון די Ca2+-בינדינג און Ca2+-פריי מאדעלן אין PDB צוטריטן 4JPZ56 און 1CFD65, בהתאמה. די מאדעלן זענען פארבעסערט געווארן ניצנדיג ספערישע פארבעסערונג צו זיכער מאכן די ריכטיגע סטערעאכעמיע און גוטע געאמעטריע. פאספאטידילכאלין, פאספאטידילעטאנאלאמין, און פאספאטידילסערין זענען דאן מאדעלירט געווארן אלס גוט-דעפינירטע ליפיד געדיכטקייטן, און די NAM און AP ליגאנדס זענען געשטעלט געווארן אין די קארעספאנדירנדע געדיכטקייטן אין די ענגע דזשאנקשאנס. קאנסטריינט טעקעס זענען גענערירט געווארן פון די SMILES סטרינג פון די איזאפארמען ניצנדיג eLBOW אין PHENIX66. צום סוף, די מאדעלן זענען פארבעסערט געווארן אין רעאלן פלאץ אין PHENIX ניצנדיג לאקאלע גריד זוכן און גלאבאלע מינימיזאציע מיט צווייטיקע סטרוקטור קאנסטריינטס. דער מאָלפּראָביטי סערווער איז גענוצט געוואָרן פֿאַר מאָדעל־פֿאַרפֿײַנערונג און סטרוקטורעלע אַנאַליז, און אילוסטראַציעס זענען דורכגעפֿירט געוואָרן מיט פּימאָל און UCSF כימעראַ X. 67,68,69 אַפּערטשער־אַנאַליז איז דורכגעפֿירט געוואָרן מיטן HOLE סערווער,70 און סיקוואַנס־קאָנסערוואַציע־מאַפּינג איז דורכגעפֿירט געוואָרן מיטן קאָנסורף סערווער.71
סטאַטיסטישע אַנאַליז איז דורכגעפירט געוואָרן מיט Igor Pro 6.2, Excel Office 365, און GraphPad Prism 7.0. אַלע קוואַנטיטאַטיווע דאַטן ווערן פּרעזענטירט ווי דורכשניט ± סטאַנדאַרד ערראָר (SEM). סטודענט'ס t-טעסט (צוויי-זייַטיק, אַנפּערד) איז געניצט געוואָרן צו פאַרגלייַכן צוויי גרופּעס. איין-וועג אַנאַליז פון וואַריאַנס (ANOVA) נאכגעפאָלגט דורך דאַנעט'ס פּאָסט האָק טעסט איז געניצט געוואָרן צו פאַרגלייַכן קייפל גרופּעס. *P< 0.05, **P< 0.01, און ***P< 0.001 זענען באטראכט געוואָרן סטאַטיסטיש באַדייטנדיק לויט דער דאַטן פאַרשפּרייטונג. Kd, Ki ווערטן, און זייערע אַסימעטרישע 95% קאָנפידענץ אינטערוואַלן זענען קאַלקולירט געוואָרן מיט GraphPad Prism 10.
פֿאַר מער פרטים וועגן דער שטודיע מעטאָדאָלאָגיע, ביטע זען די נאַטור פּאָרטפאָליאָ באַריכט סאַמערי לינקט אין דעם אַרטיקל.
דער ערשטער מאָדעל איז געבויט געוואָרן ניצנדיק די קאַלמאָדולין מאָדעלן פֿון די PDB 4JPZ און 1CFD דאַטאַבייסעס. די קאָאָרדינאַטן זענען דעפּאַזיטירט געוואָרן אין דער פּראָטעין דאַטן באַנק (PDB) אונטער אַקסעסיע נומערן 9NVN (Nan-Iav-CaM אָן ליגאַנד), 9NVO (Nan-Iav-CaM געבונדן צו ניקאָטינאַמיד), 9NVP (Nan-Iav-CaM געבונדן צו ניקאָטינאַמיד און EDTA), 9NVQ (Nan-Iav-CaM געבונדן צו אַפֿענידאָלפּיראָלין און קאַלסיום), 9NVR (Nan-Iav-CaM געבונדן צו אַפֿענידאָלפּיראָלין און EDTA), און 9NVS (Nan פּענטאַמער געבונדן צו אַפֿענידאָלפּיראָלין). די קארעספאנדירנדע קריאָ-עלעקטראָן מיקראָסקאָפּי בילדער זענען דעפּאַזיטירט אין דער עלעקטראָן מיקראָסקאָפּי דאַטאַבייס (EMDB) אונטער די פאלגענדע אַקסעסיאָן נומערן: EMD-49844 (Nan-Iav-CaM אָן ליגאַנד), EMD-49845 (Nan-Iav-CaM קאָמפּלעקס מיט ניקאָטינאַמיד), EMD-49846 (Nan-Iav-CaM קאָמפּלעקס מיט ניקאָטינאַמיד און EDTA), EMD-49847 (Nan-Iav-CaM קאָמפּלעקס מיט אַפידאָפירראָלין און קאַלסיום), EMD-49848 (Nan-Iav-CaM קאָמפּלעקס מיט אַפידאָפירראָלין און EDTA), און EMD-49849 (Nan פּענטאַמער קאָמפּלעקס מיט אַפידאָפירראָלין). די רויע דאַטן פֿאַר די פאַנגקשאַנאַל אַנאַליז ווערן פּרעזענטירט אין דעם פּאַפּיר.
פּאָסט צייט: 28סטן יאַנואַר 2026