די אַנטהעלמינטיק מעדיצין N,N-דיעטהיל-מ-טאָלואַמידע (DEET) איז געמאלדן צו ינכיבאַט AChE (אַסעטילטשאָלינעסטעראַסע) און האט פּאָטענציעל קאַרסאַנאָודזשעניק פּראָפּערטיעס רעכט צו יבעריק וואַסקיאַלעריזיישאַן. אין דעם פּאַפּיר, מיר ווייַזן אַז DEET ספּאַסיפיקלי סטימיאַלייץ ענדאָושעליאַל סעלז וואָס העכערן אַנגיאָגענעסיס, און דערמיט ינקריסינג אָנוווקס גראָוט. DEET אַקטאַווייץ סעליאַלער פּראַסעסאַז וואָס פירן צו אַנגיאָגענעסיס, אַרייַנגערעכנט פּראָוליפעריישאַן, מייגריישאַן און אַדכיזשאַן. דאָס איז פֿאַרבונדן מיט געוואקסן קיין פּראָדוקציע און VEGF אויסדרוק אין ענדאָושעליאַל סעלז. סילענסינג פון M3 אָדער ניצן פאַרמאַקאַלאַדזשיקאַל M3 ינכיבאַטערז אַבאַלישט אַלע די יפעקץ, סאַגדזשעסטינג אַז DEET-ינדוסט אַנגיאָגענעסיס איז M3-שפּירעוודיק. יקספּעראַמאַנץ ינוואַלווינג קאַלסיום סיגנאַלינג אין ענדאָושעליאַל און HEK סעלז אָוווערעקספּרעססינג מ 3 ראַסעפּטערז, ווי געזונט ווי ביינדינג און דאַקינג שטודיום, אָנווייַזן אַז DEET אקטן ווי אַ אַללאָסטעריק מאָדולאַטאָר פון מ 3 ראַסעפּטערז. דערצו, DEET ינכיבאַץ AChE, דערמיט ינקריסינג די ביאָאַוואַילאַביליטי פון אַסעטילטשאָלינע און זייַן ביינדינג צו מ 3 ראַסעפּטערז, און ענכאַנסינג פּראָאַנגיאָגעניק יפעקץ דורך אַלאָסטעריק רעגולירן.
ערשטיק עקס זענען אפגעזונדערט פון די אַאָרטאַ פון שווייצער מיסע. די יקסטראַקשאַן אופֿן איז צוגעפאסט פֿון די קאָביאַשי פּראָטאָקאָל 26 . מורינע עקס זענען קאַלטשערד אין EBM-2 מיטל סאַפּלאַמענטאַד מיט 5% היץ-ינאַקטיווייטיד פבס ביז דער פערט דורכפאָר.
די ווירקונג פון צוויי קאַנסאַנטריישאַנז פון DEET אויף די פּראָוליפעריישאַן פון HUVEC, U87MG אָדער BF16F10 איז אַנאַלייזד מיט די CyQUANT צעל פּראָוליפעריישאַן אַסאַסי קיט (מאָלעקולאַר פּראָבעס, C7026). בעקיצער, 5.103 סעלז פּער געזונט זענען סידעד אין אַ 96-געזונט טעלער, ערלויבט צו צוטשעפּען יבערנאַכטיק און דערנאָך באהאנדלט מיט DEET פֿאַר 24 שעה. נאָך רימוווינג די גראָוט מיטל, לייגן פאַרב ביינדינג לייזונג צו יעדער געזונט פון די מיקראָפּלאַטע און ינקובייט די סעלז בייַ 37 ° C פֿאַר 30 מינוט. פלואָרעססענסע לעוועלס זענען באשלאסן מיט אַ Mithras LB940 מולטימאָדע מיקראָפּלאַטע לייענער (Berthold Technologies, Bad Wildbad, דייַטשלאַנד) יקוויפּט מיט 485 nm עקסייטיישאַן פילטערס און 530 nm ימישאַן פילטערס.
HUVEC זענען סידעד אין 96-געזונט פּלאַטעס מיט אַ געדיכטקייַט פון 104 סעלז פּער געזונט. סעלז זענען באהאנדלט מיט DEET פֿאַר 24 שעה. צעל ווייאַבילאַטי איז אַססעססעד מיט אַ קאָלאָרימעטריק מטט אַסיי (Sigma-Aldrich, M5655). אָפּטיש געדיכטקייַט וואַלועס זענען באקומען אויף אַ מולטימאָדע מיקראָפּלאַטע לייענער (Mithras LB940) אין אַ ווייוולענגט פון 570 נם.
די יפעקץ פון DEET זענען געלערנט מיט ינ וויטראָ אַנגיאָגענעסיס אַססעס. באַהאַנדלונג מיט 10-8 ב אָדער 10-5 ב דעעט געוואקסן די פאָרמירונג פון קאַפּאַלערי לענג אין הווועקס (Fig. 1 אַ, ב, ווייַס באַרס). קאַמפּערד מיט די קאָנטראָל גרופּע, באַהאַנדלונג מיט DEET קאַנסאַנטריישאַנז ריינדזשינג פון 10-14 צו 10-5 ם געוויזן אַז די קאַפּאַלערי לענג ריטשט אַ פּלאַטאָ בייַ 10-8 ם דעעט (סופּפּלעמענטאַרי פייג ס 2). קיין באַטייטיק חילוק איז געפֿונען געוואָרן אין די ינ וויטראָ פּראָאַנגיאָגעניק ווירקונג פון HUVECs באהאנדלט מיט DEET אין די קאַנסאַנטריישאַן קייט פון 10-8 ם און 10-5 ם.
צו באַשליסן די ווירקונג פון DEET אויף נעאָוואַסקולאַריזאַטיאָן, מיר דורכגעקאָכט אין וויוואָו נעאָוואַסקולאַריזאַטיאָן שטודיום. נאָך 14 טעג, מיסע ינדזשעקטיד מיט ענדאָטהעליאַל סעלז פּרעקאַלטשערד מיט 10-8 ב אָדער 10-5 ב דעעט געוויזן אַ באַטייַטיק פאַרגרעסערן אין העמאָגלאָבין אינהאַלט (Fig. 1 ק, ווייַס באַרס).
דערצו, DEET-ינדוסט נעאָוואַסקולאַריזאַטיאָן איז געלערנט אין U87MG קסענאָגראַפט-שייַכעס מיסע וואָס זענען ינדזשעקטיד טעגלעך (יפּ) מיט DEET אין אַ דאָזע באַוווסט צו ינדוסירן פּלאַזמע קאַנסאַנטריישאַנז פון 10-5 ם, וואָס איז נאָרמאַל אין יקספּאָוזד יומאַנז. אין 23. דיטעקטאַבאַל טומאָרס (ד"ה טומאָרס>100 ממ3) זענען באמערקט 14 טעג נאָך ינדזשעקשאַן פון ו87מג סעלז אין מיסע. אין טאָג 28, אָנוווקס גראָוט איז באטייטיק ענכאַנסט אין דעעט-באהאנדלט מיסע קאַמפּערד מיט קאָנטראָל מיסע (Fig. 1 ד, סקווערז). דערצו, CD31 סטיינינג פון טומאָרס געוויזן אַז DEET באטייטיק געוואקסן קאַפּאַלערי שטח אָבער נישט מיקראָוועסס געדיכטקייַט. (פיג. 1e-ג).
צו באַשטימען די ראָלע פון מוסקאַרין ראַסעפּטערז אין דעטאַ-ינדוסט פּראָוליפעריישאַן, 10-8 ם אָדער 10-5 ם דעטאַ אין דעם בייַזייַן פון pFHHSiD (10-7 ב, אַ סעלעקטיוו מ 3 רעסעפּטאָר אַנטאַגאַנאַסט) איז געניצט. באַהאַנדלונג פון HUVEC. pFHHSiD גאָר אפגעשטעלט די פּראָליפעראַטיווע פּראָפּערטיעס פון דעטאַ אין אַלע קאַנסאַנטריישאַנז (טאַבלע 1).
אונטער די באדינגונגען, מיר אויך יגזאַמאַנד צי DEET וואָלט פאַרגרעסערן קאַפּאַלערי לענג אין HUVEC סעלז. סימילאַרלי, pFHHSiD באטייטיק פּריווענטיד DEET-ינדוסט קאַפּאַלערי לענג (Fig. 1 אַ, ב, גרוי באַרס). דערצו, ענלעך יקספּעראַמאַנץ זענען דורכגעקאָכט מיט M3 siRNA. כאָטש די קאָנטראָל סירנאַ איז נישט עפעקטיוו אין פּראַמאָוטינג קאַפּאַלערי פאָרמירונג, סילענסינג פון די מ 3 מוסקאַריניק רעסעפּטאָר אַבאַלישט די פיייקייט פון DEET צו פאַרגרעסערן קאַפּאַלערי לענג (Fig. 1 אַ, ב, שוואַרץ באַרס).
דערצו, ביידע 10-8 ם אָדער 10-5 ם דעעט-ינדוסט וואַסקיאַלעריזיישאַן אין וויטראָ און נעאָוואַסקולאַריזאַטיאָן אין וויוואָו זענען גאָר אפגעשטעלט דורך pFHHSiD (Fig. 1c, d, קרייזן). די רעזולטאַטן אָנווייַזן אַז DEET פּראַמאָוץ אַנגיאָגענעסיס דורך אַ פּאַטוויי שפּירעוודיק צו סעלעקטיוו M3 רעסעפּטאָר אַנטאַגאַנאַסץ אָדער M3 סירנאַ.
AChE איז די מאָלעקולאַר ציל פון DEET. דרוגס אַזאַ ווי דאָנעפּעזיל, וואָס אַקט ווי AChE ינכיבאַטערז, קענען סטימולירן עק אַנגיאָגענעסיס אין וויטראָ און אין מויז הינדלימב יסטשעמיאַ מאָדעלס14. מיר טעסטעד די ווירקונג פון צוויי קאַנסאַנטריישאַנז פון DEET אויף AChE ענזיים טעטיקייט אין HUVEC. נידעריק (קסנומקס-קסנומקס ב) און הויך (קסנומקס-קסנומקס ב) קאַנסאַנטריישאַנז פון דעעט דיקריסט ענדאָושעליאַל אַטשע טעטיקייט קאַמפּערד צו קאָנטראָל טנאָים (פיגורע קסנומקס).
ביידע קאַנסאַנטריישאַנז פון DEET (10-8 עם און 10-5 עם) רידוסט אַסעטילטשאָלינעסטעראַסע טעטיקייט אויף HUVEC. BW284c51 (10-5 ם) איז געניצט ווי אַ קאָנטראָל פֿאַר אַסעטילטשאָלינעסטעראַסע ינכיבאַטערז. רעזולטאַטן זענען אויסגעדריקט ווי פּראָצענט פון AChE טעטיקייט אויף HUVEC באהאנדלט מיט די צוויי קאַנסאַנטריישאַנז פון DEET קאַמפּערד מיט פאָרמיטל-באהאנדלט סעלז. וואַלועס זענען אויסגעדריקט ווי דורכשניטלעך ± סעם פון זעקס פרייַ יקספּעראַמאַנץ. * פּ <0.05 קאַמפּערד צו קאָנטראָל (Kruskal-Wallis און Dunn קייפל פאַרגלייַך פּרובירן).
ניטריק אַקסייד (קיין) איז ינוואַלווד אין די אַנגיאָגעניק פּראָצעס 33, דעריבער, קיין פּראָדוקציע אין DEET-סטימיאַלייטיד HUVECs איז געלערנט. דעעט-באהאנדלט ענדאָושעליאַל קיין פּראָדוקציע איז געוואקסן קאַמפּערד מיט קאָנטראָל סעלז, אָבער ריטשט באַטייַט בלויז אין אַ דאָזע פון 10-8 ם (Fig. 3c). צו באַשטימען די מאָלעקולאַר ענדערונגען קאַנטראָולינג DEET-ינדוסט קיין פּראָדוקציע, eNOS אויסדרוק און אַקטאַוויישאַן זענען אַנאַלייזד דורך מערב בלאָטינג. כאָטש DEET באַהאַנדלונג האט נישט ענדערן eNOS אויסדרוק, עס באטייטיק געוואקסן eNOs פאָספאָרילאַטיאָן אין זייַן אַקטאַווייטינג פּלאַץ (Ser-1177) בשעת דיקריסינג זייַן ינכיבאַטאָרי פּלאַץ (Thr-495) קאַמפּערד מיט אַנטריטיד סעלז אין eNOS פאַספעראַליישאַן (Fig. 3d). דערצו, די פאַרהעלטעניש פון פאָספאָרילאַטעד eNOS ביי די אַקטאַוויישאַן פּלאַץ און ינכיבאַטערי פּלאַץ איז קאַלקיאַלייטיד נאָך נאָרמאַלייזינג די סומע פון פאָספאָרילאַטעד eNOS צו די גאַנץ סומע פון ענזיים. דעם פאַרהעלטעניש איז באטייטיק געוואקסן אין הווועקס באהאנדלט מיט יעדער קאַנסאַנטריישאַן פון DEET קאַמפּערד צו אַנטריטיד סעלז (Fig. 3 ד).
צום סוף, דער אויסדרוק פון VEGF, איינער פון די הויפּט פּראָאַנגיאָגעניק סיבות, איז אַנאַלייזד דורך מערב בלאָטינג. DEET האט באטייטיק געוואקסן VEGF אויסדרוק, כוועראַז pFHHSiD גאָר אפגעשטעלט דעם אויסדרוק.
זינט די יפעקץ פון DEET זענען שפּירעוודיק צו פאַרמאַקאַלאַדזשיקאַל בלאַקייד און דאַונרעגולאַטיאָן פון M3 ראַסעפּטערז, מיר טעסטעד די כייפּאַטאַסאַס אַז DEET קען פאַרבעסערן קאַלסיום סיגנאַלינג. סאַפּרייזינגלי, DEET ניט אַנדערש צו פאַרגרעסערן סיטאָפּלאַסמיק קאַלסיום אין HUVEC (דאַטן ניט געוויזן) און HEK/M3 (Fig. 4a, b) פֿאַר ביידע קאַנסאַנטריישאַנז געניצט.
פּאָסטן צייט: 30 דעצעמבער 2024